【摘要】  　　目的 通過大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察瘦素(leptin)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)及p27在膽汁所致胃黏膜損傷中的作用。方法 SD大鼠分成4組：十二指腸胃反流(duodenogastric reflux, DGR)組、DGR+膽管結(jié)扎(bile duct ligation, BDL)組、膽管結(jié)扎組(BDL)、假手術(shù)組(control, C)組。術(shù)后12周處死大鼠，觀察胃黏膜損害及病理組織學(xué)改變，計(jì)算DIXON積分；免疫組化(SP)法檢測(cè)各組大鼠胃黏膜瘦素、COX-2及p27表達(dá)。結(jié)果 DIXON積分DGR組、DGR+BDL組較BDL組及假手術(shù)組積分均升高(P<0.05)，DGR組較DGR+BDL組DIXON積分升高(P<0.05)；DGR組、DGR+BDL組與BDL組及假手術(shù)組比較大鼠胃黏膜瘦素、COX-2高表達(dá)(P<0.05)，p27低表達(dá)(P<0.05)，DGR組比DGR+BDL組高表達(dá)尤為明顯(P<0.05)。DIXON積分與瘦素、COX-2表達(dá)呈正相關(guān)，與p27表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 膽汁反流致胃黏膜損傷過程中，瘦素、COX-2及p27蛋白與病變的修復(fù)過程有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】  膽汁 胃黏膜 瘦素 COX-2 p27法律論文發(fā)表

　　ABSTRACT: Objective  To explore the role of leptin, COX-2 and p27 in bile-induced gastric mucosal injury in rats. Methods  SD rats were divided into 4 groups: DGR (duodenogastric reflux) group, DGR+BDL (ligation of bile duct) group, BDL group and control group. The pathological changes of gastric mucosa and tight junction were observed, DIXON scores were warked out after 3 months. Immunohistochemistry was used to detect the expression of leptin, COX-2 and p27 in gastric mucosa with different lesions. Results  The DIXON scores in DGR and DGR+BDL group were higher than those in BDL group and control group (P<0.05). In addition, DIXON scores were higher in DGR group than in DGR+BDL group (P<0.05). The expressions of leptin and COX-2 increased in DGR group and DGR+BDL group than in BDL group and control group (P<0.05), while p27 decreasd (P<0.05). DGR group was more notable than DGR+BDL group (P<0.05). The expression of leptin and COX-2 was positively correlated with DIXON integral, but negatively related to p27. Conclusion  Leptin, COX-2 and p27 are all concerned with renovating pathological changes in bile-induced gastric mucosal injury in rats.

　　KEY WORDS: bile; gastric mucosal; leptin; COX-2; p27

　　近年研究發(fā)現(xiàn)反流至胃內(nèi)的膽汁、胰液和腸液等十二指腸內(nèi)容物可造成胃黏膜細(xì)胞損傷［1］。瘦素、COX-2和p27這三種因子均可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期來調(diào)節(jié)胃黏膜細(xì)胞增殖及凋亡。瘦素在細(xì)胞內(nèi)能與許多信號(hào)分子相互作用，激活JAK/STAT、MAPK、磷酸肌醇和脂類代謝等信號(hào)通路，參與多種生理功能的調(diào)控，維護(hù)黏膜上皮完整并促進(jìn)其增生［2］；COX-2的表達(dá)增加了PGE2的合成，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖并刺激bcl-2蛋白的表達(dá)，通過促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞增殖與凋亡失去平衡［3］；p27蛋白可以啟動(dòng)、誘導(dǎo)凋亡，并通過抑制cyclin-CDK復(fù)合物的活性來抑制CDKs的活性，從而負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖［4］。本研究通過SD大鼠十二指腸胃反流模型和結(jié)扎膽管后的十二指腸胃反流模型，比較觀察了膽汁致胃黏膜損傷后瘦素(leptin)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)及p27的表達(dá)，并觀察三者之間的關(guān)系。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

　　健康成年SD大鼠40只，雌雄各半，體重180-200 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。吻合口縫合采用醫(yī)用6/0的可吸收縫合線。免疫組化的主要試劑leptin兔多克隆抗體的濃縮液(bs-0108R)購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，鼠單抗p27(SC-1641)、COX-2羊多抗IgG(SC-1746)及SP試劑盒(SP-9003、SP-9002)購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

　　1.2  動(dòng)物的分組及制模 職稱論文發(fā)表期刊

　　SD大鼠隨機(jī)分為4組。胃十二指腸返流(duodenogastric reflux, DGR)組(10只)：參考董西林［5］手術(shù)方法制作十二指腸胃反流模型(將距Treitz韌帶以下4cm處的空腸側(cè)壁與胃大彎前胃部分的前壁，按順蠕動(dòng)方向進(jìn)行側(cè)側(cè)吻合,再將十二指腸Treitz韌帶以下結(jié)扎；膽管結(jié)扎(bile duct ligation, BDL)組(10只)：參考張茹［6］手術(shù)方法單純結(jié)扎膽管(選膽總管近左右肝管匯合端作結(jié)扎,保留胰管通暢，胰液繼續(xù)排入十二指腸)；DGR+BDL組(10只)：步驟同上述DGR+BDL模型；C組：假手術(shù)組(正常對(duì)照組，10只)：上腹正中切口進(jìn)入腹腔，僅翻動(dòng)胃及腸管，然后關(guān)腹。大鼠手術(shù)后12周,留取血清、胃液，采用西安派斯公司生產(chǎn)的XDJ-IA型pH監(jiān)測(cè)儀測(cè)定胃液pH值，用酶法檢測(cè)血清總膽汁酸(TBA)。

　　1.3  HE染色觀察SD大鼠胃黏膜的病理組織學(xué)變化

　　在吻合口附近(包括腺胃部分的胃竇、胃體)黏膜組織4-6塊，石蠟包埋，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織學(xué)改變。病理形態(tài)學(xué)積分標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)DIXON反流性胃炎組織學(xué)積分標(biāo)準(zhǔn)［7］，按以下胃黏膜病變的輕重程度進(jìn)行計(jì)分：小凹延長(zhǎng)，腺頸細(xì)胞增生(0-3分)；黏膜淺層血管擴(kuò)張充血(0-3分)；固有膜內(nèi)平滑肌纖維增生(0-3分),平滑肌細(xì)胞隆起或黏膜層變薄，分別將稍有隆起、隆起占黏膜層1/2或全層隆起記為1-3分，無則記為0分，間質(zhì)水腫(0-3分)，慢性或中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)輕到重(0-3分)，記錄每個(gè)病例的積分。

　　1.4  免疫組化法檢測(cè)瘦素、COX-2及p27表達(dá)

　　所有標(biāo)本經(jīng)40 mL/L中性甲醛溶液固定制作石蠟切片，載玻片均經(jīng)多聚賴氨酸防脫片處理，采用SP三步法作免疫組化染色。具體方法按試劑盒說明進(jìn)行。瘦素